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大肠杆菌检测

　　大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

　　该菌主要来于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

　　 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

　　 1 设备和材料 1.1 温箱:36±1℃。

　　 1.2 冰箱:0~4℃。

　　 1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。

　　 1.4 天平。

　　 1.5 显微镜。

　　 1.6 均质器或乳钵。

　　 1.7 平皿:直径为90mm。

　　 1.8 试管。

　　 1.9 吸管。

　　 1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。

　　 1.11 玻璃珠:直径约5mm。

　　 1.12 载玻片。

　　 1.13 酒精灯。

　　 1.14 试管架。

　　 2 培养基和试剂 2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。

　　 2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。

　　 2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。

　　 2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。

　　 2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。

　　 2.6 生理盐水。

　　 2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。

　　 3 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。

　　固体检样最好用均质器，以8 000-10 000 r/min的速度处理1min，做成1:10的均匀稀释液。

　　 3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。

　　 3.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。

　　 3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管。

　　 3.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。

　　每一稀释度接种3管，置36±1℃ 温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

　　 3.3 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃ 温箱内，培养18-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。

　　 3.4 证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置 36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。

　　凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

　　 3.5 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。

　　 4 粪大肠菌群(faecal coliform) 4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性;如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置 培养18-24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。

　　 4.2 结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。

大肠杆菌的检测方法有哪些？

　　大肠杆菌的检测方法有以下几种：一、大便常规化验加大便潜血化验，如果化验结果提示有细菌感染，那么就需要完善大便培养加药敏试验，进一步明确感染细菌的类型和敏感抗生素类型，从而可以作为大肠杆菌的一种监测方法。

　　二、肛门或者直肠内分泌物化验，也可以作为大肠杆菌这种细菌的一种监测手段。

　　三、大肠杆菌还可以在其他部位出现，比如口腔、胃部、呼吸道等，如果在口腔，进行口腔内分泌物化验可以化验出大肠杆菌感染，如果在胃部，进行胃镜检查后病例组织活检可能检出大肠杆菌。

　　如果是呼吸道，进行痰培养加药敏试验，可以化验出大肠杆菌。

　　总之大肠杆菌的检测通常都是标本化验发现的。